Diagnostics de coagulation

Les tests de dégradation du cartilage

Le test C1-2C Os et Cartilage
(Fiche d'information en anglais seulement)

Applications cliniques

 Ce test sérique mesure la quantité de dégradation du collagène en temps réel, ce qui pourrait permettre aux médecins et chercheurs de suivre l'évolution de l'arthrite rhumatoïde et de l'arthrose.

Physiologie

Les enzymes appelées métalloprotéinases de la matrice, ou MMP (1,8,13), segmentent le collagène de type I et II (respectivement de l'os et du cartilage) et forment des fragments de dégradation.

Ces fragments forment deux nouvelles terminaisons (épitopes) que les tests immunologiques d'IBEX appelés C1-2C et C2C peuvent détecter dans le sang. Les tests C1-2C et C2C détectent les structures moléculaires différentes dans l'une de ces terminaisons nouvellement formées.

Principe du test

Le test consiste en une compétition immunoenzymatique en deux étapes au moyen d'une plaque de 96 puits, en se servant de deux épitopes courts appelés peptide 287 et 378 reconnus par des anticorps monoclonaux de lapin. Le peptide conjugué KLH-287 est immobilisé dans les puits. Un anticorps monoclonal de lapin, spécifique au néoépitope qui se forme à l'extrémité C-terminale du site de clivage primaire, est ensuite ajouté. L'anticorps monoclonal de lapin se lie soit au conjugué KLH-287 immobilisé sur la plaque, ou au peptide 378 libre (dans les étalons), ou encore au néoépitope endogène dans les échantillons. Après lavage, on ajoute un anticorps de chèvre anti-lapin conjugué à la peroxydase de raifort (HRP) qui se lie à tout anticorps de lapin présent. Une solution de peroxyde contenant le chromogène tétraméthylbenzidine (TMB) est ajoutée. La peroxydase dégrade l'H 2 O 2 , entraînant l'oxydation du TMB pour former un produit de couleur bleue. La réaction est arrêtée et le signal amplifié au moyen d'un acide qui convertit le produit de la couleur bleue à la couleur jaune pouvant se quantifier par une lecture au spectrophotomètre à 450 nm. La densité optique à 450 nm est inversement proportionnelle à la quantité d'épitope.