Synonymes

La chondroïtine-sulfate-lyase, la chondroïtine-sulfate-éliminase

Source

Flavobacterium heparinum (recombinant)

No. d'enzyme

No. CAS

EC 4.2.2.5

9047-57-8

Réaction catalytique

L'enzyme segmente, par un mécanisme d'élimination, les chaînes de polysaccharides sulfatés et non sulfatés comprenant des liaisons 1‑4 entre les hexosamines et les résidus d'acide glucuronique. La réaction donne lieu à des oligosaccharides (principalement des disaccharides) contenant des acides uroniques non saturés qui peuvent se déceler à la spectroscopie UV à 232 nm. L'enzyme agit sur les chondroïtine-sulfates A et C, sur la chondroïtine et sur l'acide hyaluronique, mais ne segmente pas le dermatane-sulfate (le chondroïtine-sulfate B).

Spécificité des substrats

Les chondroïtine-sulfates A et C, la chondroïtine, l'acide hyaluronique. (L'activité spécifique avec le chondroïtine-sulfate A est environ 1,5 fois supérieure à l'activité spécifique avec le chondroïtine-sulfate C).

Propriétés

• Poids moléculaire: 79,557 Da
• Point isoélectrique: 9.0 – 9.1
• pH d'activité optimale:
  • 4.5 – 6 avec le chondroïtine-sulfate A
  • 6 – 7 avec le chondroïtine-sulfate C
• Zone de pH d'activité:
  • 3.5 – 9 avec le chondroïtine-sulfate A
  • 4.5 – 9 avec le chondroïtine-sulfate C
• Plage de température optimale: 20°C – 37°C
• La structure des cristaux a été précisée et publiée (voir les références).  

Pureté

≥90% par "HPLC" en phase inversée (chromatographie liquide à haute pression).

Activité spécifique

≥200 UI/mg (substrat: le chondroïtine-sulfate A).

Une unité internationale se définit comme étant la quantité d'enzyme qui dégagera, à partir des chondroïtine-sulfates A et C et de l'acide hyaluronique, 1.0 µmole d'oligosaccharides non saturés par minute à 30°C et à un pH de 8.0.

Stabilité

• PN 50-013 (vial de 0.5 IU): La date d'expiration est 30 mois de la date de fabrication, congelé à –70°C dans un tampon aqueux contenant du chlorure de sodium, du sodium de phosphate et du sucrose 5%.

Applications

• Comme réactif de recherche (dégradation des glycosaminoglycanes).
• Pour la préparation de disaccharides et d'oligosaccharides de chondroïtine-sulfates et la préparation de banques d'oligosaccharides.
• Pour la dégradation de l'acide hyaluronique.

Disponibilité

Le système breveté d'extraction à partir de F. heparinum et les procédés de fermentation et d'isolation que IBEX Pharmaceutiques a mis au point rendent possible la production de fortes quantités d'un produit de grande pureté.

Références

• "Enzymatic Degradation of Glycosaminoglycans". S. Ernst et al, Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology (1995), 30(5): 387-444.
  
  
• "Isolation and Expression in Escherichia coli of cslA and cslB, Genes Coding for the Chondroitin Sulfate-Degrading Enzymes Chondroitinase AC and Chondroitinase B, Respectively, from Flavobacterium heparinum". A.L. Tkalec, D. Fink, F. Blain, G. Zhang-Sun, M. Laliberté, D.C. Bennett, K. Gu, J.J.F. Zimmermann et H. Su, Applied and Environmental Microbiology (200) 66(1): 29-35.
  
  
• "Purification, Characterization and Specificity of Chondroitin Lyases and Glycuronidase from Flavobacterium heparinum". K. Gu, R.J. Linhardt, M.Laliberté, K. Gu et J. Zimmermann, Biochem. J. (1995) 312: 569- 577.
  
  
• "A comparative Study Between a Chondroitinase B and a Chondroitinase AC from Flavobacterium heparinum". M.Y.M. Michelacci et D.C.P. Dietrich, Biochemical Journal (1975) 151: 121-129.
  
  
• "Crystal Structure of Chondroitin AC Lyase, a representative of a Family of Glycosaminoglycan Degrading Enzymes". J. Féthière, B.Eggimann et M. Cygler, J. Mol. Biol. (1999) 288: 635-647.